Uutiset

Javascript on tällä hetkellä poissa käytöstä selaimessasi.Jotkut tämän sivuston ominaisuudet eivät toimi, jos JavaScript on poistettu käytöstä.
Rekisteröidy tiedoillasi ja kiinnostavalla lääkkeellä, niin yhdistämme antamasi tiedot laajan tietokantamme artikkeleihin ja lähetämme sinulle PDF-kopion välittömästi.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, infektiotautiosasto, Suzhoun yliopiston ensimmäinen sidossairaala, Suzhoun kaupunki, Jiangsun maakunta, 215000 Puh.ruoansulatuskanavan kasvaimia, joiden 5 vuoden kokonaiseloonjäämisaste on 14,1 %.Monet HCC-potilaat diagnosoidaan pitkälle edenneessä vaiheessa, joten varhainen seulonta on välttämätöntä HCC-kuolleisuuden vähentämiseksi.Yleisesti käytettyjen havaitsemisindikaattoreiden, kuten seerumin alfafetoproteiinin (AFP), linssin lektiinireaktiivisen alfafetoproteiinin (AFP-L3) ja epänormaalin protrombiinin (K-vitamiinin puutteen aiheuttama proteiini II, PIVKA-II) lisäksi nestebiopsiatekniikat Sillä on osoitettu olevan diagnostista arvoa HCC:n havaitsemisessa.Invasiivisiin toimenpiteisiin verrattuna nestebiopsialla voidaan havaita kiertäviä pahanlaatuisia aineenvaihduntatuotteita.Nestebiopsiatekniikat havaitsevat kiertävät kasvainsolut, kiertävän kasvain-DNA:n, kiertävän RNA:n ja eksosomit, ja niitä käytetään HCC:n varhaiseen seulomiseen, diagnoosiin ja prognostiseen arviointiin.Tässä artikkelissa tarkastellaan molekyylibiologiaa ja erilaisten nestebiopsiatekniikoiden soveltamista lupaavien biomarkkerien eristämiseen, jotka voivat olla käyttökelpoisia vaihtoehtoja HCC:n varhaisessa arvioinnissa korkean riskin HCC-ryhmien varhaisen seulonnan parantamiseksi.Avainsanat: nestebiopsiatekniikka, hepatosellulaarinen syöpä, korkean riskin ryhmä.
Hepatosellulaarinen syöpä (HCC) on yleinen ruoansulatuskanavan pahanlaatuinen kasvain, ja se on kuudenneksi uusien pahanlaatuisten kasvainten joukossa sekä miehillä että naisilla.1 Maailmanlaajuisesti maksasyöpä on kolmanneksi yleisin syöpäkuolemien syy keuhko- ja paksusuolensyövän jälkeen, ja sen osuus kaikista pahanlaatuisista kasvaimista aiheutuvista syöpäkuolemista on 8,3 %.1 HCC:n ennuste liittyy läheisesti diagnoosivaiheeseen.Tärkeimmät syyt huonoon eloonjäämiseen HCC:ssä ovat intrahepaattiset etäpesäkkeet, portaalilaskimokasvaintukokset ja etäpesäkkeet, jotka estävät resektion, ja monet näistä ominaisuuksista ovat jo olemassa potilailla diagnoosin aikaan.
Diagnostisten ja hoitosuositusten perusteella tärkeimmät riskitekijät HCC:n kehittymiselle ovat maksakirroosi, krooninen hepatiitti B-virus (HBV) tai hepatiitti C-virus (HCV) -infektio, alkoholiperäinen rasvamaksatauti ja alkoholiton rasvamaksatauti (NAFLD) ).2 Lisäksi HCC:n riskitekijöitä ovat aflatoksiinin saastuttaman ruoan saanti, skitosomiaasi, muut kirroosin syyt, suvussa esiintynyt maksasyövän, diabetes, liikalihavuus, tupakointi ja lääkkeiden aiheuttama maksavaurio.35- ja 45-vuotiaiden riskiryhmien tulee käydä säännöllisesti lääkärintarkastuksissa.Varhainen seulonta on tärkeä varhainen hoitostrategia HCC-potilaiden yleisen eloonjäämisen parantamiseksi.
Biomarkkereita, kuten AFP, AFP-L3 ja PIVKA-II, suositellaan HCC3,4:n varhaiseen seulomiseen.Nestebiopsiatekniikat ovat osoittaneet lupaavia tuloksia varhaisessa diagnoosissa ja hoidon arvioinnissa.5,6 Merkittävää edistystä on saavutettu HCC-nestebiopsiassa, jolla voi olla suurempi herkkyys ja spesifisyys kuin yleisesti käytetyillä seerumimarkkereilla, kuten AFP (taulukko 1).
AFP on laajalti käytetty biomarkkeri HCC:ssä ja on tällä hetkellä yksityiskohtaisin biomarkkeri, jota käytetään laajalti taudin varhaiseen seulomiseen, diagnoosiin ja arviointiin.Jatkuvasti kohonnutta AFP-tasoa pidetään HCC:n etenemisen riskitekijänä.7,8 Pienen hepatosellulaarisen karsinooman (sHCC) havaitsemisnopeus kasvaa ultraäänen ja tietokonetomografian kehittyessä, ja AFP:n on havaittu olevan erityisen epäherkkä hHCC:n havaitsemiselle kliinisessä käytännössä.Retrospektiivisen monikeskustutkimuksen9 mukaan AFP-positiivisia todettiin 46 %:lla (616/1338) HCC-tapauksista ja 23,4 %:lla (150/641) sHCC-tapauksista.Lisäksi AFP-tasot ovat kohonneet potilailla, joilla on krooninen maksasairaus ja kirroosi.10 Siten AFP:llä on rajoitettu seulontavaikutus sHCC:lle.11 Aasian ja Tyynenmeren hepatosellulaarisen karsinooman kliinisen käytännön ohjeiden mukaan AFP:n käyttöä ei suositella.12 Kliiniset todisteet viittaavat siihen, että PIVKA-II on parempi kuin AFP HCC:n hoidossa ja että PIVKA-II:n ja AFP:n yhdistelmällä on korkeampi diagnostinen arvo HCC:ssä.13 Verrattuna kudosbiopsiaan nestebiopsialla havaitaan ensisijaisesti kasvaimiin liittyvät aineenvaihduntatuotteet kehon nesteistä (veri, sylki, keuhkopussin neste, aivo-selkäydinneste tai virtsa) ja se on vähemmän invasiivinen kudoksiin.14 Lisäksi nestemäiset biopsiat voivat heijastaa pahanlaatuisia piirteitä, joita ei ole primaarisessa kasvainkudoksessa.15 Nestemäistä biopsiaa ei vielä testata kliinisessä käytännössä kaikkien kasvaintyyppien osalta, mutta niiden diagnostinen potentiaali syövässä herättää onkologien huomion.16 Nestebiopsialla voidaan havaita kiertävät kasvainsolut (CTC:t), kiertävä kasvain-DNA (cDNA), kiertävä vapaa RNA (ecRNA) ja eksosomit.Tässä artikkelissa keskustelemme eri nestebiopsiatekniikoiden ominaisuuksista, roolista ja soveltamisesta korkean riskin HCC-ryhmien varhaisessa seulonnassa.
Solunulkoisen DNA:n (cfDNA) terveiden yksilöiden verinäytteissä kuvasivat ensimmäisen kerran vuonna 1948 Mandel et ai.17 cfDNA on noin 160–180 bp pitkä soluton DNA-fragmentti, joka on peräisin pääasiassa lymfosyyteistä ja myeloidisoluista.ctDNA on kasvainsolujen perifeeriseen vereen vapauttama spesifinen mutantti-DNA-fragmentti, joka edustaa kasvainsolujen genomista informaatiota tiettyjen patofysiologisten prosessien, mukaan lukien nekroosin, apoptoosin ja erittymisen, jälkeen.ctDNA:n osuus cfDNA:n kokonaismäärästä vaihtelee suuresti kasvaintyypin mukaan, ja cDNA-fragmenttien on raportoitu olevan tyypillisesti alle 167 bp pitkiä.18 Underhillin tutkimus osoitti, että cfDNA-fragmentit ovat yleensä lyhyempiä kuin normaali cfDNA.19 Terveisiin yksilöihin verrattuna cfDNA-fragmenttien kokonaispituus syöpäpotilaiden veressä on lyhyempi, joten cfDNA:ta voidaan käyttää varhaisen kasvainseulonnan indikaattorina.Tiettyjen cfDNA-fragmenttipituuksien alaryhmien rikastaminen voi parantaa ei-metastaattisiin kiinteisiin kasvaimiin liittyvän cDNA:n havaitsemista.Tutkimukset ovat osoittaneet, että ctDNA:ta löytyy yli 75 %:ssa pitkälle edenneistä haima-, paksusuolen-, virtsarakon-, maha-suolikanavan-, maksa-, munasarja-, rinta-, melanooma- ja pään ja kaulan syövistä.20,21 Kuitenkin ctDNA:n määrä veressä riippuu kasvaimen sijainnista.22 Bettegoudin tutkimuksessa potilailla, joilla oli paksusuolen-, rinta-, maksa-, keuhko- ja eturauhassyöpä, todettiin olevan korkeammat cDNA-tasot veressä kuin muilla syövillä.Sitä vastoin potilailla, joilla oli suun syöpä, haimasyöpä, mahasyöpä ja gliooma, cDNA-pitoisuus veressä oli alhaisempi.kaksikymmentäyksi
Koska ctDNA sisältää samat geneettiset mutaatiot kuin primaariset kasvainsolut, cDNA:ta voidaan käyttää heterogeenisten kasvainspesifisten mutaatioiden ja epigeneettisten muutosten havaitsemiseen, mukaan lukien metylaatio, hydroksimetylaatio, yksittäisen nukleotidin variaatiot ja kopioluvun vaihtelut.kaksikymmentäkolme
DNA:n metylaatio on yksi yleisimmistä epigeneettisistä muutoksista, jotka johtavat geenien repressioon.Normaalisoluihin verrattuna kasvainsolugenomin metylaatiotasossa on eroja, erityisesti kasvainsuppressorigeenien metylaatiossa, mikä voidaan havaita varhaisessa vaiheessa, mikä viittaa siihen, että muutokset DNA:n metylaatiossa voivat olla merkki varhaisesta. tuumorigeneesin havaitseminen.HCC:hen liittyvät tuumorisuppressorigeenit voidaan inaktivoida promoottorimetylaatiolla, mikä stimuloi tuumorigeneesiä.24 DNA-metylaatio on ihanteellinen markkeri kasvainten varhaiseen diagnosointiin sen kudosspesifisyyden, havaittavuuden ja iästä riippumattomuutensa vuoksi.Lisäksi DNA-metylaatio on yleisempää somaattisiin mutaatioihin verrattuna, koska kohdegenomin jokaisella alueella on enemmän kohdealueita ja useita muuttuneita CpG-kohtia.25 Useiden CpG-kohtien lisäksi suuri määrä itsenäisiä hypermetyloituja lokuksia ctDNA:ssa on tunnistettu DBX2:ssa, THY1:ssä, MT1M:ssä, INK4A:ssa, VIM:ssä, FBLN1:ssä ja RGS10.26:ssa Xu et ai.Verrattaessa cfDNA-näytteitä 1098 HCC-potilaalta ja 835 terveeltä kontrollilta HCC:hen liittyvien geenien havaittiin korreloivan voimakkaasti vastaavien plasman cDNA-metylaatiotunnuksien kanssa.25 Laboratorioanalyysin perusteella kehitettiin ennustava malli, joka sisälsi 10 metylaatiomarkkeria, joiden herkkyys ja spesifisyys olivat 85,7 % ja 94,3 %, ja nämä markkerit korreloivat voimakkaasti kasvaimen massan, kasvaimen vaiheen ja hoitovasteen kanssa.Nämä tulokset osoittavat, että cDNA-metylaatiomarkkerien käytöllä on suuri lupaus HCC:n diagnosoinnissa, seurannassa ja ennusteessa.Metylaatiomallissa, joka koostui kolmesta poikkeavasti metyloidusta geenistä (APC, COX2, RASSF1A) ja yhdestä miRNA:sta (miR203), jonka Lu et al27 esittivät, mallin 27 herkkyys ja spesifisyys HBV:hen liittyvän HCC:n diagnosoimiseksi olivat vertailukelpoisia.80 %.Lisäksi malli pystyi havaitsemaan 75 % diagnosoimattomista HCC-potilaista, joiden AFP-taso oli 20 ng/ml.Ras-assosioituneen domeeniperheen 1A-proteiinin (RASSF1A) geeni on tärkein toistuva DNA-sekvenssi ihmisen genomissa.Araujo et ai.päätteli, että RASSF1A-promoottorin hypermetylaatio voisi olla arvokas biomarkkeri HCC:n varhaisessa seulonnassa ja mahdollinen molekyylikohde epigeneettiselle terapialle.28 Yhdessä tutkimuksessa seerumin RASSF1A-promoottorin hypermetylaatio havaittiin 73,3 %:lla HCC-potilaista.29 Pitkä välissä oleva nukleotidielementti 1 (LINE-1) on toinen erittäin aktiivinen retrotranspositiovälittäjä.LINE-1:n hypometylaatio havaittiin 66,7 %:ssa HCC-seeruminäytteistä DNA:sta, ja se liittyi varhaiseen uusiutumiseen ja huonoon eloonjäämiseen radikaalin resektion jälkeen.29 Hypermetylaatio on yleinen geneettinen prosessi, jolla on ainutlaatuinen rooli maksakirroosin ja HCC:n kehittymisessä.30 Sitä vastoin hydroksimetylaatio on demetylaatioprosessi, joka indusoi geenien uudelleenaktivoitumista ja ilmentymistä, ja 5-hydroksimetyylisytosiinituotteen (5-hmC) havaitsemista tässä prosessissa voidaan käyttää kasvaimen tunnistamiseen.cDNA:n metylaatio ja hydroksimetylaatio liittyvät tuumorigeneesiin ja voivat myötävaikuttaa HCC:n varhaiseen seulomiseen.Tutkimuksessa, johon osallistui 2554 henkilöä, cfDNA-näytteistä löydettiin 31 genominlaajuista 5-hmC:tä ja 32 geeniä tunnistettiin vertaamalla 5-hmC-sekvenssejä HCC-potilailla ja korkean riskin ryhmillä, kuten kroonisista sairauksista kärsivillä.Maksasairauksien diagnostiset mallit.ja kirroosi.Tämä malli oli parempi kuin AFP erottaessaan HCC:n ei-kasvainkudoksesta.
Mutaatiot koodaavilla alueilla voivat johtaa transkription poikkeavuuksiin, jotka voivat johtaa muutoksiin proteiinisekvensseissä ja lopulta syöpään.Yhden nukleotidin variantit ovat tärkeitä genomisia markkereita varhaisessa kasvainseulonnassa niiden korkean kudosluotettavuuden ja korkean kasvain- ja kudosspesifisyyden vuoksi.Lukuisat HCC:hen liittyvät tutkimukset, joissa käytettiin seuraavan sukupolven sekvensointia (NGS) syövän eksomin ja koko genomin sekvensointiin, ovat tunnistaneet yleisiä mutatoituneita solugeenejä, kuten TP53 ja CTNNB1, sekä useita, mukaan lukien ARID1A, MLL, IRF2.Uudet geenit, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 ja JAK1, osoittavat kohtalaista mutaatiota. Mutanttigeenin funktioanalyysi viittaa siihen, että muutokset kromatiinin uudelleenmuodostumisessa, Wnt/β-kateniini- ja JAK/STAT-signaalinsiirrossa, P53-solusyklin reitissä, epigeneettisissä modifioijissa, oksidatiivisissa stressireiteissä, PI3K/AKT/MTOR-reitissä ja RAS/RAF/ MAPK-kinaasireitillä on ratkaiseva rooli HCC:n onkogeneesissä.32,33 Tutkimuksessa, jossa havaittiin kasvaimeen liittyviä mutaatioita, Huang ym. havaitsivat, että ctDNA:sta riippuvien kasvaimiin liittyvien mutaatioiden esiintymistiheys oli 19,5 % ja spesifisyys 90 %. .34 Lisäksi potilailla, jotka kokivat verisuoniinvaasiota, oli todennäköisemmin ctDNA-mutaatioita (P = 0,041) ja lyhyempi eloonjääminen ilman uusiutumista (P < 0,001). Mutanttigeenin funktioanalyysi viittaa siihen, että muutokset kromatiinin uudelleenmuodostumisessa, Wnt/β-kateniini- ja JAK/STAT-signaalinsiirrossa, P53-solusyklin reitissä, epigeneettisissä modifioijissa, oksidatiivisissa stressireiteissä, PI3K/AKT/MTOR-reitissä ja RAS/RAF/ MAPK-kinaasireitillä on ratkaiseva rooli HCC:n onkogeneesissä.32,33 Tutkimuksessa, jossa havaittiin kasvaimeen liittyviä mutaatioita, Huang ym. havaitsivat, että ctDNA:sta riippuvien kasvaimiin liittyvien mutaatioiden esiintymistiheys oli 19,5 % ja spesifisyys 90 %. .34 Lisäksi potilailla, jotka kokivat verisuoniinvaasiota, oli todennäköisemmin ctDNA-mutaatioita (P = 0,041) ja lyhyempi eloonjääminen ilman uusiutumista (P < 0,001).Mutanttigeenin funktioanalyysi viittaa siihen, että muutokset kromatiinin uusiutumisessa, Wnt/β-kateniini- ja JAK/STAT-signalointissa, P53-solusyklin reitissä, epigeneettisissä modifioijissa, oksidatiivisissa stressireiteissä, PI3K/AKT/MTOR-reitissä ja RAS/RAF/MAPK-kinaasireitissä vaikuttavat kriittinen rooli HCC-tuumorigeneesissä.32,33 Tutkimuksessa, jossa havaittiin kasvaimeen liittyviä mutaatioita, Huang et al.havaitsi, että ctDNA-riippuvaisten kasvaimeen liittyvien mutaatioiden esiintyvyys oli 19,5 % ja spesifisyys 90 %..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДжжДНК,0жвростна (P=0,041) .34 Lisäksi potilailla, joilla oli verisuoniinvaasio, oli enemmän cDNA-mutaatioita (P = 0,041) ja lyhyempi sairausvapaa eloonjääminen (P < 0,001).Mutanttigeenien toiminnallinen analyysi paljasti kromatiinin uudelleenmuodostumisen, Wnt/β-kateniinin ja JAK/STAT-signaloinnin, P53-solusyklin, epigeneettiset modifioijat, oksidatiivisen stressin reitin, PI3K/AKT/MTOR-reitin ja RAS/RAF/MAPK-reitin. kinaasireitillä on kriittinen rooli HCC:n onkogeneesissä. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， huang 等 人 发现 肿瘤 相关 依赖于 依赖于 ctdna 的 频率 为 19,5% ， 为 为 90% .34 此外 ， 经历 血管 侵犯 患者 更 有 可能 发生 ctdna突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）. 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 Tutkimuksessa, jossa havaittiin kasvaimeen liittyviä mutaatioita, Huang et al.havaitsivat, että kasvaimeen liittyvät mutaatiot olivat 19,5 % riippuvaisia ​​cDNA:sta spesifisyyden ollessa 90 % 34. Lisäksi potilailla, joille oli tehty verisuoniinvaasio, kehittyi todennäköisemmin cDNA.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutaatio (P = 0,041) ja lyhyempi sairausvapaa eloonjääminen (P < 0,001).Toinen yleinen HCC-ohjaingeeni on TP53, jonka mutaatioaste on yli 30 %.Tutkimukset ovat osoittaneet, että TP53-mutaatioiden esiintymistiheys ctDNA:ssa veressä ja virtsassa vaihtelee 5–60 prosentin välillä.35 Johanin tutkimus osoitti, että ctDNA-mutaatiospektrillä myöhäisessä HCC:ssä on samanlainen mutaatioaste kuin varhaisessa HCC:ssä, mukaan lukien TERT-promoottori (51 %), TP53 (32 %), CTNNB1 (17 %), PTEN (8 %), mutaatiot AXIN1., ARID2, KMT2D ja TSC2 (kukin 6 %).36 β-kateniini (CTNNB1) onkogeenillä on tärkeä rooli Wnt-signalointireitissä.Transkription koaktivaattori CTNNB1 voi edistää geenien ilmentymistä, mikä voi johtaa solujen lisääntymiseen, apoptoosin estoon ja angiogeneesiin.CTNNB1 voi myös olla vuorovaikutuksessa TERT:n kanssa hepatosyyttien transformaation indusoimiseksi.33 TERT-promoottori mutatoituu usein joissakin kiinteissä kasvaimissa.Muutokset TERT:ssä, joka on yksi varhaisimmista geneettisistä muutoksista HCC:n pahanlaatuisessa transformaatiossa, voivat johtaa telomeraasin uudelleenaktivoitumiseen kirroosissa olevissa maksasoluissa ja edistää lisääntymistä ja estää ikääntymistä.Mutaatioita 33-37 TERT-promoottorissa on raportoitu esiintyvän 59-90 %:lla potilaista, joilla on proliferatiivisia maksan kyhmyjä ja varhainen HCC, ja ne liittyvät eloonjäämiseen.38
Kopioiden lukumäärän muutokset (CNA) ovat tärkeä somaattisten mutaatioiden alatyyppi.Tutkimukset ovat osoittaneet, että CNA:n laajalle levinnyt ja fokusoitu taakka on genominen allekirjoitus, joka pystyy ennustamaan kasvaimen immuuni-infiltraatiota ja poissulkemista joissakin syöpätyypeissä.39 Aktiivinen infiltraatiosignalointi, korkea sytolyyttinen aktiivisuus, vaikea tulehdus ja geneettiset markkerit, jotka liittyvät antigeenin esittelyyn HCC:ssä.Yhden nukleotidin polymorfismien datajoukon analyysi 477 koehenkilössä paljasti, että keskushermoston kuormitus on alhainen.Sitä vastoin kromosomaalisesti epästabiilit kasvaimet, joilla oli suuri laaja CNA-kuorma, osoittivat immuunihyljinnän merkkejä ja ne liittyivät lisääntymiseen, DNA:n korjaukseen ja TP53:n toimintahäiriöön.Xu et ai.osoitti, että HCC-ryhmällä oli korkeammat CNA-pisteet kuin kroonisen maksasairauden ryhmässä.40 Käyttämällä yhden solun koko genomin sekvensointia CNA:iden havaittiin ilmaantuvan varhaisessa vaiheessa maksakarsinogeneesiä ja pysyvän suhteellisen vakaina kasvaimen etenemisen aikana.41 Chung et ai.havaitsivat, että cfDNA-tasot olivat merkittävästi kohonneet HCC-potilailla ja että genominlaajuiset CNA:t cfDNA:ssa olivat tärkeä itsenäinen prognostinen markkeri HCC-potilailla, joita hoidettiin sorafenibillä.42 Potilailla, joilla oli suurempi CNA-taakka, oli todennäköisemmin sairauden eteneminen ja kuolema kuin niillä, joilla oli pienempi CNA-taakka.Ollerich et ai.havaitsivat, että kopioluvun epästabiilisuusindeksiä (CNI) voidaan käyttää CNA:n arvioimiseen syöpäpotilaiden cfDNA:ssa.He totesivat, että potilailla, joilla oli edennyt syöpä, oli huomattavasti korkeammat CNI-pisteet kuin kontrolliryhmässä, joka arvioi potilaan vastetta systeemiseen kemoterapiaan ja immunoterapiaan.43 Nämä tulokset viittaavat siihen, että nestemäisistä biopsianäytteistä löydetyt CNA:t voivat toimia prognostisina indikaattoreina potilailla, joilla on edennyt syöpä.HCC systeemisen hoidon taustalla.
Tällä hetkellä ctDNA:n havaitsemiseen käytetyt menetelmät voidaan jakaa kohdennettuihin ja ei-kohdennettuihin menetelmiin.Lyhyesti sanottuna kohdistetut menetelmät, kuten digitaalinen polymeraasiketjureaktio (dPCR), BEAMing digitaalinen PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq ja Tam-Seq, ovat erittäin herkkiä ennalta määritetyille geeneille.Kohteen ulkopuoliset menetelmät, kuten koko genomin sekvensointi ja NGS, tarjoavat kattavan kuvan koko genomimaisemasta.44 Kohdepaneeleihin verrattuna koko genomin sekvensointi voi havaita pistemutaatioiden ja insertioiden lisäksi myös uudelleenjärjestelyjä ja kopiomäärän vaihteluita.ennuste, ja CTC ja cfDNA ovat hyviä indikaattoreita, joita voidaan käyttää HCC:n dynaamiseen seurantaan.45 Lisäksi cfDNA-analyysi voi olla hyödyllisempi HCC:n havaitsemisessa.Yan et ai.osoittivat, että cfDNA:ta HCC-potilaiden plasmassa oli merkittävästi korkeampi kuin potilailla, joilla oli maksafibroosi ja terveillä kontrolleilla.AFP:hen verrattuna ctDNA:n odotetaan olevan parempi seulontamarkkeri varhaiselle HCC:lle.46 Prospektiivisessa tutkimuksessa 47 nestemäistä biopsiaa, joissa testattiin cfDNA:ta ja proteiinia populaatiopopulaatiossa, niiden osoitettiin olevan tehokkaita erottamaan HCC-potilaat potilaista, joilla ei ollut HCC:tä.331 normaalin ultraäänipotilaan ja AFP-negatiivisen potilaan seurannassa cfDNA:n herkkyys ja spesifisyys HCC:n diagnosoimiseksi olivat 100 % ja 94 %, joten cDNA pystyi havaitsemaan HCC:n oireettomilla HBsAg-seropositiivisilla yksilöillä.Yeo48-tutkimuksessa RASSF1A-promoottorin hypermetylaatiota todettiin korkeasti (92,5 %) potilailla, joilla oli HCC.Lisäksi Xu et ai.loi diagnostisen mallin ennustaakseen HCC:tä käyttämällä paneelia spesifisiä metylaatiomarkkereita, joiden spesifisyys ja herkkyys on 90,5 % ja 83,3 %.Paneelin avulla HCC-potilaat voidaan erottaa potilaista, joilla on muita maksasairaus, mikä on parempi kuin AFP.He havaitsivat myös, että normaaleissa kontrolleissa, jotka olivat positiivisia, voi olla riskitekijöitä HCC:lle, kuten HBV-infektio tai alkoholin käyttöhistoria.25 Oletamme, että HCC:n korkean riskin tekijät voivat edistää cfDNA:n hypermetylaatiota, mikä sitten edistää HCC:n etenemistä, ja siten cfDNA:lla voi olla keskeinen rooli korkean riskin ryhmien seulonnassa.Cai et ai.Tee yhteenveto kaikista ctDNA-mutaatioista ja tarjoaa vankan strategian potilaiden kasvaintaakan arvioimiseksi.49 Tällä strategialla voidaan tunnistaa tuumorigeneesi keskimäärin 4,6 kuukautta ennen kuvantamismuutosta, ja se on osoittanut ylivoimaista diagnostista suorituskykyä seerumin biomarkkereihin AFP, AFP-L3 ja PIVKA-II verrattuna.cDNA-testauksen diagnostinen arvo on osoitettu, kun kuvan arviointia ei ole saatavilla, joten cDNA-testaus on arvokasta varhaisen HCC:n diagnosoinnissa korkean riskin ryhmissä.Äskettäin tutkijat käyttivät NGS-tekniikkaa analysoidakseen monimuuttujan geneettisen variaation indikaattoreita (mukaan lukien 5-hydroksimetyylisytosiini, 5'-motiivi, fragmentaatio, nukleosomijälki, HIFI) 3204 kliinisessä näytteessä ja cfDNA:ssa.50 uudelleen validoitua HIFI-mallia, joissa oli kolme itsenäistä juna-, testi- ja testisarjaa, osoittivat vakaan ja luotettavan eron HCC- ja ei-HCC-populaatioiden välillä 95,79 %:n ja 95,42 %:n herkkyydellä HCC-spesifisissä testisarjoissa ja testisarjoissa.Sukupuolet olivat 95,00 % ja 97,83 %.HIFI-menetelmän diagnostinen arvo on korkeampi kuin AFP:n HCC:n erottamisessa kirroosista.Lisäksi ctDNA:ta käytetään myös kirurgisessa hoidossa.Atsushi et ai.määritti ctDNA:n seerumin preoperatiiviset tasot HCC-potilailla ja havaitsi, että uusiutumisnopeus ja maksanulkoisten metastaasien määrä cDNA-positiivisessa ryhmässä olivat merkittävästi korkeammat kuin cDNA-negatiivisessa ryhmässä, ja cDNA-tasot korreloivat merkittävästi.kasvaimen etenemisen kanssa.51 Koska ctDNA on erittäin herkkä biomarkkeri, se voi ennustaa HCC:n kyvyn tunkeutua suoniin.Wang et ai.suoritti koko genomin sekvensoinnin 46 potilaalle, joilla oli HCC, ja monimuuttuja-analyysi osoitti, että cDNA-variantin alleelifrekvenssin kynnysarvo mikrosuonten invaasiolle on 0,83 %, herkkyys 89,7 % ja spesifisyys 80,0 %.riippumaton riskitekijä mikrovaskulaariselle invaasiolle resekoitavissa HCC:ssä, mikä viittaa siihen, että cDNA voi auttaa ohjaamaan optimaalista hoitoa.Yhteenvetona voidaan todeta, että ctDNA on täysin osallisena HCC:n esiintymisessä ja kehittymisessä, ja sitä voidaan käyttää varhaiseen seulomiseen, kirurgiseen arviointiin ja taudin seurantaan.
CTC:t ovat pahanlaatuisia soluja, jotka ovat peräisin primaarisista kasvaimista tai metastaaseista, jotka metastasoituvat verenkiertoon.Kasvainsolut erittävät matriksimetalloproteinaaseja (MMP), jotka hajottavat tyvikalvon, jolloin kasvainsolut pääsevät suoraan veri- ja imusuoniin.Useimmat CTC:t eliminoituvat kuitenkin nopeasti anoikien, immuunihyökkäyksen tai leikkausjännityksen vaikutuksesta.53 Epiteeli-mesenkymaalisen siirtymän (EMT) avulla CTC:t voidaan eristää helposti primaarisesta kasvainkudoksesta, tunkeutua kapillaareihin ja saavuttaa merkittävästi parempi eloonjääminen, metastasoituminen, invasiivisuus ja lääkeresistenssi.Tutkimukset ovat osoittaneet, että primaarisissa metastaattisissa kasvaimissa eri kasvainsolujen välillä on syvällistä heterogeenisuutta.Siten CTC-analyysi voi johtaa kattavaan ymmärrykseen kasvainsolujen heterogeenisyydestä.54
HCC:hen liittyvien CTC:iden spesifisiä markkereita ovat glypikaani-3 (GPC3), asialoglykoproteiinireseptori (ASGPR), epiteelisolujen adheesiomolekyyli (EpCAM) ja kantasoluihin liittyvät markkerit, kuten CD44, CD90, 55 ja solujen välinen adheesiomolekyyli 1 (ICAM111).) .56 GPC3-markkeri on solukalvoon ankkuroitu proteiini, jota käytetään kliinisesti HCC:n patologiseen analyysiin ja karakterisointiin.57 GPC3:n ilmentyminen on yleisempää HCC-kasvainsoluissa, joissa on keskinkertainen ja alhainen erilaistumisaste, ja se edistää maksan ulkopuolista migraatiota;lisäksi GPC3+ CTC:iden läsnäolo osoittaa metastaattista HCC:tä.58 ASGPR on transmembraaninen proteiini, joka ilmentyy vain hepatosyyttien pinnalla ja ekspressoituu voimakkaasti hyvin erilaistuneessa HCC:ssä.EpCAM on yksi yleisimmin käytetyistä kalvoon liittyvistä proteiineista CTC:iden sieppaamiseen.EpCAM on tunnistettu kantasoluominaisuuksien omaavien HCC-solujen pintamarkkeriksi59, joka korreloi HCC:n eri kliinisopatologisten piirteiden, kuten verisuoniinvaasioiden, arvioitujen AFP-tasojen ja pitkälle edenneen maksasyövän vaiheen kanssa Barcelonan sairaalassa (BCLC).60 CTC EMT -fenotyyppi on erittäin metastaattinen.54 EMT-prosessia CTC:ssä edistävät HCC:n etäpesäkkeitä.EMT-markkerien, kuten vimentiinin, kierteen, E-box sinkkisormisidoksen (ZEB) 1:n, ZEB2:n, etanan, etanan ja E-kadheriinin, ilmentymistä on tutkittu maksaperäisissä CTC:issä HCC-potilailta.58 Chengin kehittämä CanPatrol™-järjestelmä [61] luokitteli CTC:t kolmeen fenotyyppiseen alaryhmään pääasiassa ilmentyneiden markkerien perusteella: epiteelin fenotyyppi (EpCAM, CK8/18/19), mesenkymaalinen fenotyyppi (vimentiini, kierretty) ja sekafenotyypit.176 potilaalla kokonais-CTC oli parempi kuin AFP erottaessaan HCC:n hyvänlaatuisesta maksasairaudesta.Kokonais-CTC:n, AFP:n ja yhdistetyn kokonais-CTC:n ja AFP:n AUC-arvot olivat 0,774 (95 % CI, 0,704–0,834), 0,669 (95 % CI, 0,587–0,750) ja 0,821 (95 % CI, 0,7856–0. ).), vastaavasti.EMT:hen perustuva CTC-luokitus voi ennustaa HCC-diagnoosin, varhaisen uusiutumisen, etäpesäkkeiden muodostumisen ja lyhyemmän kokonaisajan.
Tällä hetkellä CSC:iden havaitsemismenetelmiä ovat fysikaaliset ja biologiset menetelmät.Fysikaaliset menetelmät, joita usein kutsutaan biofysikaalisiin ominaisuuksiin perustuvaksi rikastamiseksi, riippuvat pääasiassa CSC:n fysikaalisista ominaisuuksista, kuten koosta, tiheydestä, varauksesta, liikkuvuudesta ja muodonmuutosta.Fysikaalisista ominaisuuksista riippuen on olemassa erilaisia ​​menetelmiä, kuten suodatuspohjaiset järjestelmät, dielektroforeesi jne. Jälkimmäinen, joka tunnetaan myös nimellä immunoaffiniteettipohjainen rikastus, perustuu pääasiassa antigeeni-vasta-ainesitoutumiseen, koska menetelmässä käytetään vasta-aineita kasvainspesifisiä biomarkkereita vastaan. kuten EpCAM, ASGPR, ihmisen epidermaalinen kasvutekijäreseptori 2 (HER2), eturauhasspesifinen antigeeni (PSA), ihmisen pansytokeratiini (P-CK) ja karbamoyylifosfaattisyntaasi 1 (CPS1).62 Toinen tyyppi, jota kutsutaan ei-rikastusmenetelmäksi, käyttää virtaussytometriaa CTC:iden erottamiseen leukosyyteistä korkeamman tuman ja sytoplasman välisen suhteen ja koon perusteella.Tällä hetkellä ainoa FDA:n hyväksymä testi CTC:iden havaitsemiseen on Cell-Search™-järjestelmä, joka käyttää EpCAM-solupintamarkkeria. Yhdistetty markkereihin perustuva CTC-detektio voisi kuitenkin lisätä positiivisuusastetta.54 ASGPR:n ja CPS1:n vastaisten vasta-aineiden sekoitus saavutti 91 %:n CTC-havaitsemisasteen HCC-potilailla.63 Zhang ym. käyttivät CTC-sirua, jossa oli vasta-aineita ASGPR:tä vastaan, P. -CK ja CPS1, ja erottivat HCC-potilaat hyvänlaatuista maksasairautta tai ei-HCC-syöpää sairastavista potilaista 100 %:lla.64 Wangin tutkimus havaitsi EpCAM+ CTC:t 60 %:lla 42 HCC-potilaasta ja havaitsi merkittäviä korrelaatioita molempien positiivisuuden välillä. TNM-vaiheessa olevien CTC:iden määrä ja määrä.65 Guo ym. havaitsivat, että CTC-peräinen PCR-pistemäärä oli kohonnut 125/171:stä (73 %) potilaasta, joiden AFP-taso oli <20 ng/ml, herkkyydellä 72,5 % ja spesifisyys 95,0 % verrattuna 57,0 % ja 90,0 % AFP:n raja-arvoon 20 ng/ml.66 AFP:n ja CTC:n yhdistelmä voi parantaa HCC:n havaitsemista.45 Uskotaan, että CTC:illä on etu AFP:hen verrattuna ryhmien varhaisessa seulonnassa. suuri riski HCC:lle. Yhdistetty markkereihin perustuva CTC-detektio voisi kuitenkin lisätä positiivisuusastetta.54 ASGPR:n ja CPS1:n vastaisten vasta-aineiden sekoitus saavutti 91 %:n CTC-havaitsemisasteen HCC-potilailla.63 Zhang ym. käyttivät CTC-sirua, jossa oli vasta-aineita ASGPR:tä vastaan, P. -CK ja CPS1, ja erottivat HCC-potilaat hyvänlaatuista maksasairautta tai ei-HCC-syöpää sairastavista potilaista 100 %:lla.64 Wangin tutkimus havaitsi EpCAM+ CTC:t 60 %:lla 42 HCC-potilaasta ja havaitsi merkittäviä korrelaatioita molempien positiivisuuden välillä. TNM-vaiheessa olevien CTC:iden määrä ja määrä.65 Guo ym. havaitsivat, että CTC-peräinen PCR-pistemäärä oli kohonnut 125/171:stä (73 %) potilaasta, joiden AFP-taso oli <20 ng/ml, herkkyydellä 72,5 % ja spesifisyys 95,0 % verrattuna 57,0 % ja 90,0 % AFP:n raja-arvoon 20 ng/ml.66 AFP:n ja CTC:n yhdistelmä voi parantaa HCC:n havaitsemista.45 Uskotaan, että CTC:illä on etu AFP:hen verrattuna ryhmien varhaisessa seulonnassa. suuri riski HCC:lle.Markkereihin perustuva yhdistetty CTC:iden havaitseminen voi kuitenkin lisätä positiivisten tulosten prosenttiosuutta.54 Anti-ASGPR- ja CPS1-vasta-aineiden seos saavutti 91 %:n CTC:n havaitsemisasteen potilailla, joilla oli HCC.63 Zhang et al.käytti CTC-sirua, jossa oli vasta-aineita ASGPR:tä, P-CK:ta ja CPS1:tä vastaan, ja erotti myös potilaat, joilla oli HCC, hyvänlaatuista maksasairautta tai ei-HCC:tä sairastavista potilaista 100 prosentilla.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. TNM-vaiheen CTC:iden esiintymistiheys ja lukumäärä.65 Guo ym. havaitsivat, että CTC:istä johdettu PCR oli kohonnut 125/171:llä (73 %) potilaalla, joiden AFP-tasot olivat <20 ng/ml, ja joiden herkkyys oli 72,5 % ja spesifisyys 95,0 % verrattuna 57,0 %:iin ja 90,0 % AFP:lle raja-arvolla 20 ng/ml.66 AFP:n ja CTC:n yhdistelmä voi parantaa HCC:n havaitsemista.45 CTC:illä katsotaan olevan etu AFP:hen verrattuna varhaisessa seulonnassa. ryhmiä.joilla on suuri HCC-riski.Markkereihin perustuva yhdistetty CTC:iden havaitseminen voi kuitenkin lisätä positiivisten tulosten prosenttiosuutta.54 Anti-ASGPR- ja CPS1-vasta-aineiden sekoitus saavutti 91 % CTC:n havaitsemisasteen potilailla, joilla oli HCC.63 Zhang et ai.käytti ASGPR-, P-CK- ja CPS1-vasta-aineita sisältäviä CTC-siruja ja erotti HCC-potilaat hyvänlaatuisesta maksasairaudesta ja ei-HCC-potilaat 100 %:lla.64 Wangin tutkimuksessa tunnistettiin 60 % EpCAM+ CTC:istä 42 HCC-potilaalla ja havaittiin merkittävä korrelaatio ilmaantuvuuden ja CTC:iden määrän välillä TNM-vaiheessa. 65 GUO 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ctc 衍生 的 的 评分 升高 ， 敏感性 为 72,5%， 特异性 为 95,0%， 而 在 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值为20 ng/ml 时的特异性为57,0 % 和90,0 %. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72,5%， 为 95,0%， afp 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 20ng/ml 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。。65 Guo et ai.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. havaitsi, että 125/171 (73 %) potilaalla, joiden AFP-tasot olivat alle 20 ng/ml, CTC-peräiset PCR-arvot olivat koholla 72,5 %:n herkkyydellä ja 95,0 %:n spesifisyydellä, kun taas AFP oli raja-spesifisyydessä. oli 20 ng/ml.ml oli 57,0 % ja 90,0 %.66 ORP:n ja CTC:n yhdistelmä parantaa HCC:n havaitsemista.45 CTC:n uskotaan olevan parempi kuin AFP korkean riskin HCC-populaatioiden varhaisessa seulonnassa.Siksi CTC-positiivisille ja korkean riskin HCC-ryhmille CTC-testaus tulisi rutiininomaisesti yhdistää ultraääni- ja AFP-tunnistukseen.CTC:itä pidetään kuitenkin tärkeinä kasvaimen etäpesäkkeiden ja uusiutumisen ennustajina, eikä CTC:iden havaitsemista suositella itsenäisesti diagnostisena työkaluna.62 Siksi CTC voi toimia paremmin ennustavana biomarkkerina kuin muut tällä hetkellä käytetyt markkerit. Zhou ym. havaitsivat, että potilailla, joilla oli kohonnut määrä EpCAM+ CTC:itä ja sääteleviä T-soluja, oli suurempi riski kehittää HCC:n uusiutumista kuin niillä, joilla oli vähän CTC:itä, uusiutumissuhteen ollessa 66,7 % vs. 10,3 % (P < 0,001).67 Zhong ym. raportoivat samankaltaisesta tutkimuksesta.68 Lisäksi Qi havaitsi, että 101 112:sta HCC-potilaasta (90,81 %), mukaan lukien ne, joilla oli alkuvaiheen sairaus, oli positiivinen CTC:lle ja että hyvin pieniä HCC-kyhmyjä havaittiin 3:n jälkeen. 5 kuukauden seurantaan. Zhou ym. havaitsivat, että potilailla, joilla oli kohonnut määrä EpCAM+ CTC:itä ja sääteleviä T-soluja, oli suurempi riski kehittää HCC:n uusiutumista kuin niillä, joilla oli vähän CTC:itä. Uusiutumissuhde oli 66,7 % vs 10,3 % (P < 0,001).67 A samanlaisen tutkimuksen raportoivat Zhong et al.68 Lisäksi Qi havaitsi, että 101 112 potilaasta (90,81 %), joilla oli HCC, mukaan lukien ne, joilla oli alkuvaiheen sairaus, oli positiivinen CTC:lle ja että erittäin pieniä HCC-kyhmyjä havaittiin 3 - 20 vuoden kuluttua. 5 kuukauden seuranta. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou ym. havaitsivat, että potilailla, joilla oli kohonnut EpCAM+ CTC:t ja säätelevät T-solut, oli suurempi riski saada HCC:n uusiutumista kuin niillä, joilla oli alhainen CTC, uusiutumisaste oli 66,7 % vs. 10,3 % (P<0,001)67.Samanlaisen tutkimuksen suorittivat Zhong et ai.68. Lisäksi Qi havaitsi, että 101:llä 112 potilaasta (90,81 %), joilla oli HCC, mukaan lukien ne, joilla oli varhainen sairaus, oli CTC:t ja että erittäin pieniä HCC-kyhmyjä havaittiin 3–5 kuukauden seurannan jälkeen. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)…………………………………………… Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et ai.havaitsivat, että potilailla, joilla oli kohonnut EpCAM+ CTC:t ja säätelevät T-solut, oli suurempi riski HCC:n uusiutumiseen verrattuna potilaisiin, joilla oli vähemmän CTC:itä, ja uusiutumisaste oli vastaavasti 66,7 % ja 10,3 % (P < 0,001).Samanlaisen tutkimuksen raportoivat Zhong et ai.68 Lisäksi Qi havaitsi, että 101:llä 112 HCC-potilaasta (90,81 %), mukaan lukien potilaat, joilla oli varhainen sairaus, oli positiivisia CTC-tuloksia ja löysi hyvin pieniä HCC-kyhmyjä kolmen käynnin jälkeen.Tarkkailu jopa 5 kuukautta.He löysivät myös CTC:itä 12 potilaalta, joilla oli krooninen HBV-infektio, ja pieniä HCC-kasvaimia 5 kuukauden sisällä kahdelta CTC-positiivisesta potilaasta.69 Näin ollen CTC:itä voidaan käyttää ennustamaan HCC:tä, 70 mutta niitä voidaan käyttää rutiininomaisesti ennustavina biomarkkereina.
Kuten cfDNA, cfRNA vapautuu verenkiertoon eri järjestelmien kautta.Nämä ääreisveren molekyylit edustavat alkuperää olevaa syöpäkudosta.Verrattuna ei-invasiivisilla menetelmillä havaittuihin markkereihin, cfRNA:t ovat dynaamisemmin säädeltyjä, kudosspesifisempiä ja runsaasti solunulkoisessa ympäristössä.71 miRNA:n (miRNA:n) merkitys ja diagnostinen arvo HCC:ssä on raportoitu monissa tutkimuksissa.miRNA:t ovat endogeenisiä ei-koodaavia RNA:ita (ncRNA:ita), jotka säätelevät erilaisia ​​molekyylibiologisia aktiivisuuksia estämällä kohdelähetti-RNA:iden (mRNA:iden) translaatiota.miRNA:t sijaitsevat apoptoottisissa kappaleissa, jotka on kapseloitu eksosomeihin, mutta ne voivat myös sitoutua stabiilisti ääreisveren seerumin proteiineihin ja lipideihin, ja niitä voidaan käyttää HCC:n arvioimiseen.mikroRNA:t osallistuvat maksan regeneraatioon, lipidiaineenvaihduntaan, apoptoosiin, tulehdukseen ja HCC:n kehittymiseen.72 Onkogeeniset miRNA:t, kuten miR-21, miR-155 ja miR-221, tunnetaan hyvin HCC:ssä.Erityisesti miR-21:llä on avainrooli kollageenisynteesissä ekstrasellulaarisessa matriisissa ja fibroosissa ja se edistää hepatokarsinogeneesiä aktivoimalla hematopoieettisia kantasoluja.72,73 Kasvainsuppressori-miRNA:ta HCC:ssä ovat miRNA-122, miRNA-29, Let-7-perhe ja miRNA-15-perhe.Let-7-perhe koostuu monista kasvainsuppressori-miRNA:ista, jotka kohdistuvat RAS-perheeseen.MiR-15-perheeseen kuuluvat miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 ja miR-497, joilla on komplementaariset sekvenssit tietyille mRNA:ille.Lisäksi pitkät ei-koodaavat RNA:t (lncRNA:t) ja sirkulaariset RNA:t (cirRNA:t) ovat myös tärkeitä HCC:n varhaisessa seulonnassa.lncRNA:t edustavat laajinta ncRNA-luokkaa, mukaan lukien mRNA:n kaltaiset ncRNA:t, ja ne ovat mukana monien ihmisten sairauksien patogeneesissä.LncRNA:illa on säätelevä rooli maksan mikroympäristössä ja kroonisessa maksasairaudessa.74 CircRNA:t ovat myös ncRNA:iden luokka, jolla on useita toimintoja geeniekspression säätelyssä.Viime aikoina circRNA:ita on pidetty HCC:n diagnostisina työkaluina.
Kierrättävällä vapaalla RNA:lla on huomattava stabiilius, mukaan lukien kestävyys lämpötilaa, pH:ta ja RNaasia vastaan, mikä tekee fnRNA:n eristämisestä ääreisverestä vähemmän työlästä käyttämällä tavanomaisia ​​RNA-puhdistusmenetelmiä.Yleisimmin käytettyjä menetelmiä ovat NGS, microarray ja RT-qPCR.NGS mahdollistaa mikroRNA:iden mittaamisen koko genomissa.Tämä menetelmä on kuitenkin kallis, eikä analyysiä ole standardoitu.Sitä vastoin RT-qPCR on halpa, amplifioi nopeasti nukleiinihappoja ja tarjoaa monia etuja, kuten korkeamman herkkyyden, tarkkuuden, laajemman dynaamisen alueen ja vähemmän näytteitä vaativan.Mikrosirut ovat toinen menetelmä, jota käytetään miRNA:n havaitsemiseen, joka perustuu kohdemiRNA:iden herkkään ja spesifiseen hybridisaatioon komplementaaristen DNA-koettimien kanssa, 75 mutta microarray-tietojen analysointi on aikaa vievää.
Kiertävän miR-122:n ja Let-7:n on raportoitu olevan potentiaalisesti hyödyllisiä varhaisen vaiheen HCC:n diagnosoinnissa korkean riskin ryhmissä, merkkiaineissa potilailla, joilla on HBV:hen liittyviä premaligneja kyhmyjä ja varhaisen vaiheen HCC:tä.76 Cai et ai.havaitsi, että Let-7-perheen jäsenillä (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 ja miR-199a/b) on krooninen riski. HCC hepatiittipotilailla.Let-7-perhe voi toimia tehokkaana korvikebiomarkkerina ennustamaan HCC:n kehittymistä krooniseen C-hepatiittiin liittyvissä korkean riskin ryhmissä. 77 miR-122:lla on korkea diagnostinen tarkkuus varhaisen HCC:n havaitsemisessa maksakirroosipotilailla.78 Seerumissa kiertävä MiR-107 on myös arvioitu HCC:n alkuvaiheessa, 79 ja se on osoittanut hyvää potentiaalia suuren riskin väestössä.Zhou ym. raportoivat, että miRNA:iden paneeli (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a ja miR-801) voi erottaa HCC:n kroonisesta hepatiitti B:stä (CHB) ja kirroosista herkkyys oli 79,1 % ja 75 % ja spesifisyys 76,4 % ja 91,1 %.80 HBV:hen liittyvässä HCC:ssä havaitsimme, että miR150-tasot olivat merkittävästi alentuneet verrattuna kroonisiin HBV-potilaisiin, joilla ei ollut HCC:tä (herkkyys 79,1 %, spesifisyys 76,5 %).-224 oli kohonnut HCC:ssä terveisiin kontrolleihin verrattuna, ja alaryhmäanalyysit osoittivat korkeampia tasoja potilailla, joilla oli HBV:hen liittyvä HCC.B-hepatiittiin liittyvä kirroosi ja HCC-potilaat tunnistivat siRNA-luokittajan, joka sisälsi seitsemän eri tavalla ilmentynyttä siRNA:ta, jotka voivat havaita HCC:n eri kontrolleissa;AUC-alue varhaisessa seulonnassa on parempi kuin AFP:n vapaaehtoisilla.He havaitsivat, että neljä miRNA:ta (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p ja miR-365a-3p) pystyivät erottamaan HCC-potilaat potilaista, joilla ei ole HCC:tä.Viittä yli-ilmentävää miRNA:ta (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p ja miR-148a-3p) pidetään mahdollisina HBV-infektioina HCC-, kirroosi- ja CHB-biomarkkereissa, erityisesti miR-34a-5p voi olla maksakirroosin biomarkkereita,85 ja se voi olla potentiaalisia biomarkkereita HCC:n varhaiseen seulomiseen korkean riskin populaatioissa.HCC:ssä tutkituin lncRNA on erittäin aktivoitunut maksasyövässä (HULC).Muut tutkimukset ovat osoittaneet, että HCC-potilailla kiertävää HULC:tä voidaan käyttää diagnostisena markkerina, koska tämä lncRNA on voimakkaasti säädelty HCC-potilailla terveisiin yksilöihin verrattuna.71,86 Muiden lnRNA:iden joukossa LINC00152:ta pidetään parhaana diagnostisena lncRNA:na korkean AUC:n, herkkyyden ja spesifisyyden vuoksi.86 Yhdessä tutkimuksessa LINC00152:n perifeerisen veren ilmentyminen lisääntyi vähitellen normaaleista terveistä kontrolleista potilaisiin, joilla oli CHB ja kirroosi, ja lopulta se oli korkein HCC:ssä.Tutkimukset circSMARCA5:n ilmentymisestä HCC-potilaiden plasmassa ovat osoittaneet HCC:n ilmentymisen asteittaista vähenemistä hepatiitista kirroosiin ja syövän esiasteisiin.87 ROC-käyrien analyysi vahvisti näiden circRNA:iden potentiaalin erottaa hepatiitti- tai maksakirroosipotilaat hepatiitti- tai maksakirroosipotilaista, erityisesti niistä, joiden AFP-tasot ovat alle 200 ng/ml.Lisäksi Zhu analysoi 13 617 syklistä RNA:ta HBV:hen liittyvien HCC-potilaiden plasmanäytteistä ja vahvisti, että 6 syklistä RNA:ta ilmentyi eri tavalla HCC:ssä ja HBV:hen liittyvässä kirroosissa, mikä viittaa siihen, että cRNA:t voivat olla hyödyllisiä.merkkiaineet korkean riskin ryhmien, kuten maksasairaus- ja skleroosipotilaiden, varhaiseen seulomiseen.88
Eksosomit ovat kalvorakkuloita, joiden halkaisija on 40–160 nm;useat solunsisäiset rakkulat fuusioituvat solukalvon kanssa ja vapautuvat solunulkoiseen matriisiin.Ne sisältävät monia aktiivisia komponentteja, mukaan lukien lipidejä, proteiineja, RNA:ta ja DNA:ta, ja niillä on keskeinen rooli solujen välisessä viestinnässä, sekä HCC- että ei-HCC-soluissa.89,90 Eksosomit säätelevät HCC:n etenemistä aktivoimalla hepatosyyttifibroblasteja ja tähtisoluja, immuunisoluja, normaaleja hepatosyyttejä ja HCC-soluja.91 Kasvainmikroympäristössä kasvainsolut tuottavat suuren määrän eksosomeja, jotka kulkeutuvat syöpäsoluista epäkypsiin soluihin, jotka puolestaan ​​osallistuvat onkogeneesiin, hajoamiseen ja solujen signalointiin.92 Tutkimukset ovat osoittaneet, että eksosomit voivat siirtää onkogeenejä normaaleihin soluihin patologisten prosessien aikana, mikä voi olla yksi kasvaimen invaasion ja etäpesäkkeiden muodostumisen mekanismeista.93 Eksosomien rooli syövän etenemisessä voi olla dynaaminen ja syöpätyypille spesifinen. 89 Vierekkäiset tai kaukana olevat solut voivat sisäistää eksosomeja säätelemään vastaanottajasoluissa useita kohdegeenejä, jotka voivat olla mukana solujen välisissä kommunikaatioioneissa ja solun mikroympäristön vuorovaikutuksessa. välittää solujen signalointia ja aineenvaihduntaa.94 Eksosomien lastimolekyylien ominaisuudet ja dynaamiset muutokset heijastavat suoraan vanhempien kasvainsolujen ominaisuuksia ja dynaamisia muutoksia,95 mikä on myös perusta eksosomien käytölle syövän diagnosoinnissa ja ennusteissa sekä yksilöllisen vasteen ennustamiselle syöpähoitoon. ..96
Perinteiset laboratoriomenetelmät eksosomien eristämiseen ja analysointiin ovat monimutkaisia, monivaiheisia ja aikaa vieviä, mukaan lukien ultrasentrifugointi, suodatus, kokoekskluusiokromatografia, immunoaffiniteettipuhdistus, Western blotting, entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA), PCR ja virtausanalyysi.Pienoistettuja järjestelmiä ja mikro-/nanoteknologiaa käyttäviä lab-on-a-chip -alustoja kehitetään laajasti eksosomien nopeaa ja kätevää in situ eristämistä varten.Nanohiukkasten seurantaanalyysi (NTA) on laajalti käytetty menetelmä eksosomien koon ja pitoisuuden karakterisoimiseksi, mukaan lukien menetelmät, kuten magneettiset nanopartikkelit ja polyhydroksialkanoaatit.Mikrofluidisilla ja sähkökemiallisilla menetelmillä voidaan myös havaita eksosomeja nopeasti korkeilla saannoilla.
Eksosomaaliset proteiinit ovat tärkeitä merkkiaineita HCC:n diagnosoinnissa.Arbelaizin tutkimuksessa 98 RasGAP SH3:a sitovan proteiinin (G3BP) ja polymeerisen immunoglobuliinireseptorin (PIGR) taso oli merkittävästi kohonnut HCC:stä johdetuissa eksosomeissa, ja näiden kahden proteiinin oletettu yhdistetty teho oli parempi kuin AFP:n.Raudan ylikuormitus on tärkeä tekijä, joka edistää HCC:n kehittymistä.Tseng raportoi, että hepsidiinillä voi olla keskeinen rooli HCC-resistenssissä.99 HCC-potilaiden seerumeista johdetuissa eksosomeissa oli merkittävästi suurempi kopiomäärä hepsidiinin mRNA-variantteja kuin terveillä vastineilla, mikä viittaa siihen, että hepsidiini voi olla uusi diagnostinen biomarkkeri HCC:lle.100 HCC:n tuottamissa eksosomeissa oleva 14-3-3ζ-proteiini voi vähentää T-solujen aktivaatiota, proliferaatiota ja erilaistumista ja voi indusoida T-solujen transformaation säätely-T-soluiksi, mikä johtaa T-solujen ehtymiseen.101 Tätä tukevat useat tutkimukset, joissa tutkitaan tuumorin välttämistä immuunivalvonnasta, 102 jotka voivat myötävaikuttaa HCC-tuumorigeneesiin.
Plasmassa tai seerumissa olevan ecRNA:n lisäksi RNA:lla rikastettuja eksosomeja voidaan käyttää ei-invasiiviseen reaaliaikaiseen stagingin varhaisessa kasvaimen seulonnassa ja kasvaimen evoluution ja hoitovasteen määrittämiseen.Eksosomaalisen miRNA-21:n taso veren seerumissa HCC-ryhmässä oli 2,21 kertaa korkeampi kuin CHB-ryhmässä ja HCC-ryhmässä 5,57 kertaa korkeampi kuin terveellä väestöllä.Wang-tutkimuksessa eksosomit lisäsivät merkittävästi HCC:tä verrattuna kirroosipotilaisiin, joiden AUC-arvot olivat 0,83 (95 % CI 0,74–0,93) ja 0,94 (95 % CI 0,88–1,00).104 Saadut tiedot selvensivät spesifisten eksosomaalisten lastimolekyylien osallistumista onkogeneesin ja HCC:n etenemisen säätelyyn.105 MiR-221:n, miR-103:n, miR-181c:n, miR-181a:n, miR-93:n ja miR-26a:n ekspressio seerumissa on johdonmukaista.ja etäpesäkkeitä, ja miR21-tasot olivat paljon korkeammat HCC-potilailla kuin terveillä kontrolleilla ja myös CHB-potilailla.102 LncRNA:lla oli mahdollista diagnostista arvoa HCC:ssä.Tutkimukset ovat osoittaneet, että HCC-potilaiden seerumeista johdetuissa eksosomeissa on merkittävästi korkeammat tasot LINC00161:tä, LINC000635:tä ja lncRNA:ta, jotka aktivoidaan transformoimalla kasvutekijä-β kuin potilailla, joilla ei ole HCC:tä, ja nämä lncRNA:t liittyvät vahvasti TNM-vaiheeseen ja kasvaimen tilavuuteen.110 Conigliaro et ai.CD90+-eksosomien havaittiin ilmentävän korkeita lncRNAH19-tasoja, mikä lisäsi merkittävästi verisuonten endoteelikasvutekijän (VEGF) vapautumista ja VEGF-R1-reseptorin tuotantoa stimuloiden siten angiogeneesiä.93 CircRNA:t ovat toisen tyyppisiä eksosomaalisia ncRNA:ita – ne ilmentyvät alemmilla, mutta stabiileilla tasoilla eri lajeissa, ja circRNA:t osoittavat myös spesifisiä solutyyppejä, kudostyyppejä, kehitysvaihetta ja säätelyaktiivisuutta.111 sircRNA:ta ovat diagnostisia biomarkkereita varhaiselle ja minimaalisesti invasiiviselle syövälle.112 Viimeaikaiset kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että yksittäisten miRNA:iden spesifisyys HCC:n ennustamisessa ei ole ihanteellinen.Siksi monimutkainen havaitseminen käyttämällä useita määrityksiä (esim. miR-122 ja miR-48a yhdessä AFP:n kanssa) voi parantaa varhaisen HCC:n tunnistamista ja HCC:n erottamista kirroosista.100
CHB- ja maksakirroosipotilaat ovat yleisin korkean riskin ryhmä HCC:n kehittymiselle.Korkean riskin ryhmille, kun kestävä virologinen vaste on saavutettu, tulisi kehittää HCC-riskiin perustuva kustannustehokas seurantastrategia, ja varhainen seulonta on avainasemassa HCC:n diagnosoinnin ja hoidon parantamisessa korkealla kustannustehokkuussuhteella2. ..Syövän varhaisseulontamenetelmillä on monia rajoituksia: tehokkaita varhaisseulontamenetelmiä ei ole kehitetty useimpiin syöpätyyppeihin, ja hoitoon sitoutuminen on yleensä alhaista.Perinteisiin varhaisiin seulontamenetelmiin verrattuna nestebiopsiatekniikalla on ilmeisiä etuja: näytteenoton helppous, panrakin havaitseminen, hyvä näytteen toistettavuus ja tehokas vaste kasvaimen heterogeenisyyteen.Nestebiopsiaan liittyvien menetelmien kustannustehokkuuden vuoksi niiden käyttöä HCC-seulonnassa ei ole rutiininomaisesti testattu.Huolimatta edistymisestä tarkassa havaitsemisessa molekyylitasolla, nestebiopsia on kallista HCC:n havaitsemiseksi kohdepotilailla, mikä rajoittaa sen laajaa käyttöä verrattuna erityisiin kuvantamismenetelmiin, kuten ultraääni- ja magneettikuvaukseen.113 114 Aikaisempi tutkimus kuitenkin osoitti, että nestebiopsia osoitti merkittävää hyötyä laatusovitettujen elinvuosien (QALY) suhteen.115 Nestebiopsian hyödyt varhaisessa mahalaukun ja nenänielun karsinoomassa on myös osoitettu.116 117 Nykyinen näkemys on, että nestebiopsia voi täydentää seerumin biomarkkereita ja radiologista seulontaa kasvainten havaitsemisessa ja diagnosoinnissa.117 118
Nykyisen kirjallisuuden mukaan nestebiopsiateknologia on osoittanut huomattavasti suurempaa herkkyyttä ja spesifisyyttä korkean riskin ryhmien maksasyövän varhaisessa seulonnassa.Nestebiopsian tyypistä riippumatta se voi erottaa HCC:n korkean riskin henkilöistä, joilla ei ole HCC:tä, mikä viittaa varhaisen seulonnan tärkeyteen, koska erot korkean riskin ja terveiden yksilöiden välillä ovat ilmeisiä.ctDNA:lla on lyhyt puoliintumisaika, ja sitä voidaan käyttää HCC:n havaitsemiseen, joten kaikki muutokset kasvaimesta peräisin olevassa cDNA:ssa voivat tarjota reaaliaikaista konkreettista näyttöä kasvaimen etenemisestä, erityisesti pienille kasvaimille.Korkea ctDNA-taso osoittaa syövän kehittymisen ja leviämisen ja on varhainen indikaattori etenemisestä ja uusiutumisesta.Lisäksi potilaat voivat ctDNA-tulosten perusteella saada yksilöllistä hoitoa ja seurantaa.119 Erityiset metylaatiokohdat voivat olla parempi merkki kuin AFP HCC:n ja kirroosikyhmyjen varhaisessa tunnistamisessa.Resekoitavissa HCC-tapauksissa korkeat cDNA-tasot osoittavat mikrovaskulaarista invaasiota ja leikkauksen jälkeistä uusiutumista ja etäpesäkkeitä.Muutokset kopiomäärässä liittyvät HCC-potilaiden eloonjäämiseen.Voidaan olettaa, että cDNA-arviointi voi olla osallisena HCC:n kokonaishoidossa, ja cDNA voi toimia tehokkaana terapeuttisen modulaation indikaattorina.CtDNA:n spesifisiin geneettisiin mutaatioihin perustuvat markkerit on otettu käyttöön kliinisissä ohjeissa tehokkuuden ennustamiseksi ja lääkeresistenssin seuraamiseksi.ctDNA-testaus voi olla hyödyllisin nestemäinen biopsiatyökalu varhaiseen seulomiseen.CTC:illä on myös keskeinen rooli korkean riskin HCC-ryhmien varhaisessa seulonnassa.Erilaiset HCC:hen liittyvien CTC:iden markkerit ovat erityisen tärkeitä HCC:n alkaessa, kehittymisessä ja uusiutumisessa.Membraanivesikkeleinä eksosomit osallistuvat solujen väliseen viestintään, erityisesti HCC-soluissa.Kierrettävät mikroRNA:t ovat stabiileja veressä ja voivat siten olla hyödyllisempiä HCC:n varhaisessa seulonnassa.Vähitellen löydettiin eksosomaalisia proteiineja ja runsaasti RNA:ta sisältäviä eksosomeja, ja niiden ennustava teho HCC:lle varmistettiin.Mielenkiintoista on, että HCC:n eri etiologiat voivat liittyä myös erilaisiin mutaatioihin, joten voimme valita erilaisia ​​biomarkkereita varhaiseen seulomiseen HCC:n eri etiologioiden perusteella.120
Nykyiset nestebiopsiatekniikat ovat kuitenkin kyseenalaisia ​​stabiilisuuden suhteen, eivätkä ne pysty itsenäisesti suorittamaan HCC:n varhaista seulontaa tai seurantaa, mutta ne voivat silti täydentää yksilöllistä seulontaa ja diagnoosia.121 Nestebiopsian muotona ctDNA:n, CTC:n, cfRNA:n ja eksosomiin liittyvän AFP:n tai PIVKA-II:n havaitsemisella ja kuvantamisella on lupaavia sovelluksia HCC:n varhaisessa diagnosoinnissa ja ennustamisessa.CtDNA:n vereen vapautumisen tarkka mekanismi on kuitenkin vielä selvittämättä.ctDNA:n biologisten perusominaisuuksien paljastaminen voi helpottaa sen käyttöä markkerina.CtDNA:n pieni määrä verenkierrossa ja tiukat näytteenkäsittelyvaatimukset ovat haasteita cDNA-detektion kliiniselle toteutukselle HCC:ssä.Lisäksi geneettisillä mutaatioilla ei ole erityispiirteitä, jotka mahdollistaisivat syöpää aiheuttavien aineiden tarkan tunnistamisen.Koska normaaleissa kudoksissa on myös useita geneettisiä ja somaattisia variantteja, nestebiopsialla tunnistetuilla geneettisillä mutaatioilla voi olla rajallista hyötyä HCC:n varhaisessa seulonnassa.122 Hyvin määriteltyjen hyödyllisten geenikohteiden ja biomarkkerien rajoitukset, jotka auttavat erottamaan cDNA:n ei-kasvain-DNA:sta, ovat tärkeimpiä kysymyksiä cDNA:n käytössä.herkkien ja spesifisten markkerien käyttökelpoisuuden puute CTC:iden havaitsemiseen.Vain eläviä soluja, joilla oli metastaattista potentiaalia, löydettiin, ja CSC-rikastettujen markkerien optimaalinen yhdistelmä oli epäselvä.CTC-solujen eristäminen viljelyä varten ja niiden mutaatioprofiilien arviointi on myös haastava tehtävä.Eksosomien tunnistamiseen, eristämiseen ja puhdistamiseen liittyvien ongelmien vuoksi spesifinen molekyylimekanismi on edelleen epäselvä, ja aikaisemmat tutkimukset eksosomien ja HCC:n mekanismista eivät ole olleet perusteellisia ja tapaa, jolla miRNA: t, lncRNA: t ja proteiinit lajitellaan eksosomeiksi , ja ei ole selvää, onko eksosomien sisäänotto tietyntyyppinen prosessi.Eksosomien käyttö HCC:n diagnosointiin ja hoitoon on vielä prekliinisessä vaiheessa.Nestemäisten biopsiamenettelyjen standardoinnin puute, kuten veren keräämiseen käytettyjen putkien tyyppi, veritilavuus, näytteiden säilytys ja havaitseminen, eristäminen ja rikastaminen, voi estää niiden käytön rutiininomaisessa kliinisessä käytännössä lääketieteellisten keskusten välisten käytäntöjen erojen vuoksi.Nestebiopsian tehokkuutta HCC:n varhaisessa seulonnassa, diagnoosissa, tehokkuuden arvioinnissa ja ennustamisessa on vielä tutkimatta, erityisesti korkean riskin ryhmissä.Nestemäisellä biopsiateknologialla on suuri potentiaali, ja sen odotetaan lähitulevaisuudessa laajalti käytettävän maksasyövän kliinisessä käytännössä.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et ai.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN arvioi 36 syövän esiintyvyyden ja kuolleisuuden 185 maassa.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Kansallisen terveystoimikunnan päämaja.Primaarisen maksasyövän diagnoosin ja hoidon kriteerit (2022 painos) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et ai.Ohjeet hepatosellulaarisen karsinooman diagnosointiin ja hoitoon (2019 painos).Maksa syöpä.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et ai.Maksasyövän kliiniset käytännön ohjeet: Japanese Society for Liver Diseases, 2017 (JSH-HCC 4th Guidelines), 2019 päivitys.Maksasairauksien säiliö.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Nestebiopsia kroonisessa maksasairaudessa.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Nestemäinen rintasyövän biopsia: kohdennettu katsaus.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Hepatosellulaarisen karsinooman seuranta: nykyiset parhaat käytännöt ja tulevaisuuden ohjeet.Gastroenterologia.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Kliiniset ohjeet EASL-EORTC: hepatosellulaarisen karsinooman hoito.J Hepariini.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et ai.AFP:n ja HCCR-1:n yhdistetty analyysi hyödyllisinä serologisina markkereina pienessä hepatosellulaarisessa karsinoomassa: tuleva kohorttitutkimus.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et ai.Plasman mikroRNA-125b:n erilainen ilmentyminen hepatiitti B -virukseen liittyvässä maksasairaudessa ja hepatiitti B -viruksen aiheuttaman hepatosellulaarisen karsinooman diagnostinen potentiaali.Maksasairauksien säiliö.2017;47(4):312-320.doi: 10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et ai.Alfa-fetoproteiinin biologia ja merkitys hepatosellulaarisessa karsinoomassa.Maksa int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et ai.Kliiniset ohjeet hepatosellulaarisen karsinooman hoitoon Aasian ja Tyynenmeren alueella: 2017 päivitys.Kansainvälinen maksasairauksien järjestö.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et ai.Seerumin PIVKA-II:n diagnostinen arvo yksinään tai yhdessä AFP:n kanssa kiinalaisilla potilailla, joilla on hepatosellulaarinen karsinooma.Dis Mark.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et ai.Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ei-plasma humoraalinen nestebiopsia: lähempänä kasvainta!solu.2020; 9(11).doi: 10,3390/solut9112486
15. Mader S, Pantel K. Nestebiopsia: nykytila ​​ja tulevaisuuden näkymät.Hoito Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et ai.Nestepohjainen syöpäbiopsia: multimodaalinen diagnostinen työkalu kliinisessä onkologiassa.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleiinihapot ihmisen plasmassa.CR Seances Soc Biol Fil.1948; 142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et ai.Verenkierrossa olevan kasvain-DNA:n edistynyt havaitseminen fragmentin kokoanalyysillä.Tiede kääntää lääketieteen.2018; 10:466.doi: 10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et ai.Kiertävän kasvaimen DNA-fragmentin pituus.PLOS-geenit.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Circulating tuumori DNA: lupaava biomarkkeri nestepohjaisessa syövän biopsiassa.kohdekasvain.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et ai.Kiertävän kasvain-DNA:n havaitseminen ihmisen pahanlaatuisten kasvainten varhaisessa ja myöhäisessä vaiheessa.Tiede kääntää lääketieteen.2014;6(224):224ra24.doi: 10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Nestebiopsia kiinteän syövän mutaatioiden ennustavaan analyysiin: patologin näkökulma.J Biotekniikka.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et ai.Varhainen kasvaimen havaitseminen kiertävän plasma-DNA-seulonnan avulla: hype vai toivo?Belgian kliininen laki.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Hepatiittiviruksen ja ikääntymisen vaikutus DNA:n metylaatioon ihmisen hepatokarsinogeneesissä.Histopatologia.2010;25(5):647–654.doi: 10,14670/HH-25,647